Hepatopancreatitis hoại tử (NHP) bị nhiễm Penaeus vannamei

nữ cá bố mẹ: Hiệu lực trên các thông số sinh sản,

nauplii và chất lượng ấu trùng

Luis Fernando Aranguren, Boris Briñez, Lácides Aragón, Camilo Platz, Xenia Caraballo

Andres Suarez, Marcela Salazar

⁎

Corporacion Centro de Investigación de la Acuacultura de Colombia CENIACUA, Carrera 8a

# 96-60, Bogotá, Colombia

Nhận được 11 tháng năm 2005, nhận được trong hình thức sửa đổi ngày 06 tháng 3 2006; chấp nhận ngày 29 Tháng 3 2006

Tóm tắt

Hepatopancreatitis hoại tử (NHP) là một bệnh của Penaeus nuôi tôm thẻ chân trắng gây ra bởi một trong tế bào gram âm

vi khuẩn rickettsia giống như sinh vật. NHP lần đầu tiên được báo cáo ở Texas vào năm 1985, chịu trách nhiệm về tỉ lệ chết trong ao nuôi tôm

ở Trung và Nam Mỹ. Sự tăng trưởng và sự phát triển của NHP trong các tế bào hepatopancreatic biểu mô có liên quan

chán ăn, thờ ơ, teo cơ bụng, làm mềm bộ xương ngoài, chậm phát triển và chết khác nhau, từ 20% đến

95%.

Mặc dù NHP có thể gây tử vong cao trong các ao nuôi thương mại, nó đã được coi là một vấn đề duy nhất trong các ao cá bố mẹ và

phòng thí nghiệm trưởng thành do sự gia tăng bố mẹ chết ở Colombia. Để đánh giá hiệu quả tiêu cực thêm

mức độ này, chúng tôi nghiên cứu ảnh hưởng của nhiễm trùng NHP khi các hành vi sinh sản của phụ nữ và ảnh hưởng của mẹ

nhiễm trùng nauplii và chất lượng ấu trùng.

Cá bố mẹ từ NHP ao bị ảnh hưởng đã được chuyển đến phòng thí nghiệm trưởng thành.Sau khi copula, những con cái đã được chuyển giao cho

xe tăng sinh sản cá nhân. Sau khi sinh sản, con cái hy sinh cho mô bệnh học và phân tích PCR, trong khi những quả trứng

được đặt trong các bể cá nhân cho nở. Nữ giới được phân loại thành ba nhóm theo kết quả mô bệnh học của họ:

NHP tiêu cực (n = 23) đã không có tổn thương NHP, tích cực cho NHP với tổn thương cấp 1 (n = 20) và nữ tích cực NHP với tổn thương

loại 2 (n = 12). Đối với mỗi nhóm, chúng tôi đã phân tích số lượng trứng, tỷ lệ nở và số lượng của nauplii mỗi phụ nữ. Của chúng tôi

Kết quả cho thấy rằng phụ nữ với các tổn thương NHP cấp 2 trình bày một giảm đáng kể số lượng trứng và nauplii (Pb0.05)

so với con cái tiêu cực và nữ NHP lớp 1 NHP bệnh. Không có sự khác biệt đáng kể nào được tìm thấy trong nở

tỷ lệ phần trăm giữa ba nhóm.

Mức Triglyceride trong nauplii II cao hơn đáng kể ở phụ nữ NHP tiêu cực hơn so với ở phụ nữ với lớp 2 NHP (Pb0.05),

trong khi không có sự khác biệt giữa NHP tiêu cực và 1 nữ lớp. Không có sự khác biệt đáng kể nào được tìm thấy glucose và

mức độ cholesterol trong nauplii giữa ba nhóm.

Không có sự khác biệt đã được tìm thấy trong sự tồn tại ở I zoea, mysis I, PL-1 và PL-10 cho ba nhóm. Tuy nhiên, sau khi một căng thẳng mặn

kiểm tra, sự tồn tại PL-10 giảm đáng kể ở ấu trùng từ những con cái NHP tích cực. Ngoài ra giảm đáng kể trong chiều dài PL-10

cũng được quan sát trong các thế hệ con cháu của những phụ nữ này (lớp 1 và lớp 2).

Nuôi trồng thủy sản 258 (2006) 337-343

www.elsevier.com / xác định vị trí / thủy trực tuyến

⁎ tác giả tương ứng. Điện thoại: +57 1 636 9770, fax: +57 1 218 6644.

Địa chỉ E-mail: [email protected] (M. Salazar).

0044-8486 / $ - vấn đề trước © 2006 Elsevier BV. Tất cả các quyền.

doi: 10.1016/j.aquaculture.2006.03.051This nghiên cứu đã chứng minh rằng bệnh NHP trong spawners tôm nữ ảnh hưởng đến cả trưởng thành và larviculture gây ra một

giảm trong số lượng trứng và nauplii mỗi phụ nữ, giảm ở các cấp độ chất béo trung tính trong nauplii II và giảm ấu trùng

tăng trưởng và sức đề kháng để kiểm tra áp lực thẩm thấu ở giai đoạn PL-10.

© 2006 Elsevier B. V. Tất cả các quyền.

Từ khóa: tôm thẻ chân trắng Penaeus, hepatopancreatitis hoại tử; Cá bố mẹ, chất lượng ấu trùng; Triglyceride

1. Giới thiệu

Hepatopancreatitis hoại tử (NHP) là một bệnh

penaeid tôm gây ra bởi một trong tế bào gram âm

rickettsial như vi khuẩn (NHPB), mục tiêu hình ống

các tế bào biểu mô của gan tụy (HP). Lâm sàng dấu hiệu của

NHP bệnh bao gồm tiêu thụ thức ăn giảm, ruột rỗng, mềm mại

vỏ, cơ quan trạng thái bình thường, mang màu đen hoặc tối tăm, hôn mê và

đánh dấu teo gan tụy các. Tỉ lệ chết có thể được

nghiêm trọng khác nhau, from25% đến 95% trong ao ảnh hưởng nghiêm trọng

(Loy et al, 1996). NHP ban đầu được xác định trong năm 1990 tại

nuôi tôm thẻ chân trắng Penaeus ở Texas (Mỹ) (Frelier et al.

1992) và đã được báo cáo ở một số địa điểm

khắp Tây bán cầu bao gồm Peru, Ecua

dor, Venezuela, Brazil, Nicaragua, Panama, Costa Rica và

Mexico (Loy et al, 1996; Aguirre-Guzmán và Ascencio

Valle, 2000). Ở Colombia, NHP bệnh không gây ra

tỉ lệ chết trong các ao nuôi thương mại, nhưng ảnh hưởng đến bố mẹ

nuôi ao và nuôi tôm trong phòng thí nghiệm trưởng thành,

kết quả là mất đi và giảm nauplii sẵn có (Brinez

et al, 2003.).

NHP chủ yếu là gan tụy tôm thiệt hại,

có thể làm giảm chức năng về chuyển giao lipid và lưu trữ.

Chuyển giao lipid từ gan tụy với buồng trứng thông qua

haemolymph trong buồng trứng trưởng thành đã được de-

monstrated trong nữ Penaeus japonicus (Teshima et al.

1989). Loài Penaeid trình bày một tăng lipid tổng số

tập trung trong buồng trứng, và trong hầu hết các loài, một con

comitant giảm mức độ lipid trong hepatopan-

creas có thể được quan sát thấy. Do đó nghĩ rằng

gan tụy là nguồn gốc của các chất béo tích tụ trong

buồng trứng (Wouters et al, 2001). Tuy nhiên, bằng chứng

cho thấy đa số các chất béo buồng trứng tích lũy

bắt nguồn từ chế độ ăn uống fromthe và không fromde tổng hợp lipid novo,

mà là quá thấp đáng kể góp phần tăng

trong chất béo buồng trứng (Wouters et al, 1999).

Xét rằng NHP nghiêm trọng ảnh hưởng đến hepatopan

creas và rõ rệt làm giảm lượng thức ăn tiêu thụ, nó có thể can thiệp

với nội dung lipid buồng trứng bằng cách giảm lưu trữ lipid và

chuyển giao và bằng cách làm giảm tiêu hóa lipid thông qua chế độ ăn uống.

Là nauplii phát triển nở, và biến thái để

zoea đòi hỏi một lượng lớn năng lượng được chuyển giao

từ con cái. Nó đã được mặc nhiên công nhận rằng trứng với nhiều

dự trữ trao đổi chất có một xác suất cao hơn sản xuất

nauplii rằng sẽ tồn tại đến giai đoạn zoea (Lavens và

Sorgeloos năm 1991; Ouellet et al, 1992). Để xác định whe

có NHP bệnh ở phụ nữ có thể thay đổi khả năng sinh sản của họ,

nghiên cứu này phân tích các thông số sinh sản,

nauplii thành phần sinh hóa và sự phát triển của ấu trùng, sur-

vival và PL10 đề kháng với một bài kiểm tra căng thẳng độ mặn ở phụ nữ

có và không có bệnh NHP.

2. Vật liệu và phương pháp

2.1. Động vật và trưởng thành

Dành cho người lớn tôm P. vannamei (N35 g) đã được lựa chọn từ một

ao nuôi cá bố mẹ bị nhiễm NHP xác nhận bởi

phân tích mô bệnh học của động vật có triệu chứng và

ao sống sót cuối cùng của 12,5% trong nền văn hóa cá bố mẹ

sân khấu. Những người sống sót được thả trong một phòng thí nghiệm trưởng thành.

Sau một thời gian thích nghi, 1000 phụ nữ bị

eyestalk đơn phương cắt bỏ. Phụ nữ được thả với

nam giới (1:1.35 tỷ số giới tính) trong các bể fiberglassmaturation đen

với mật độ của 6 loài động vật m2

. Nước được trao đổi hàng ngày

(300%), nhiệt độ được duy trì ở mức 28 ° C và độ mặn

lưu giữ tại 35 ppt. Chế độ ăn uống bao gồm mực ống 50%, 15% polycha

etes, 30% Artemia và 5% công thức thương mại, chia

thành bốn khẩu phần bằng nhau hàng ngày đã được điều chỉnh bằng một

tổng cộng hàng ngày cung cấp tương đương với 25% sống trọng lượng ướt.

2.2. Thử nghiệm thiết kế và đánh giá của reproduc

chính kịp thời các thông số

Để giảm thiểu sự thay đổi do sinh sản

ngày khác nhau, phụ nữ chỉ sinh ra tại một ngày nhất định

và (bao gồm động vật có dấu hiệu lâm sàng của nhiễm trùng NHP)

được phân tích. Hai xét nghiệm khác nhau đã được thực hiện:

đầu tiên thử nghiệm, các thông số sinh sản được đánh giá trong

31 copulated phụ nữ, trong khi đó ở thí nghiệm thứ hai,

các thông số sinh sản, cũng như ấu trùng nauplii

chất lượng được xác định trong 24 spawns.

Phụ nữ Copulated được chuyển giao cho cá nhân spaw

Ning xe tăng 250 l, chứa đầy nước biển lọc (30 ppt

độ mặn và 32 ° C). Sau khi đẻ trứng, mỗi con cái

hy sinh cho mô bệnh học và chẩn đoán PCR của NHP.

338 L. F. Aranguren et al. / Nuôi trồng thủy sản 258 (2006) 337-343All spawns nở cá nhân. Số lượng trứng mỗi

sinh sản được ước tính bằng cách khuấy động những chiếc xe tăng sinh sản và

đếm sáu mẫu 1 ml mỗi. Các số của khả thi

nauplii mỗi sinh sản được ước tính một cách tương tự sau khi

lựa chọn tích cực phototropism. Nở tỷ lệ phần trăm

tính như nauplii / trứng × 100.

2.3. Larviculture

Nauplii ở giai đoạn II từ 24 spawns cá nhân được

chuyển đến phòng thí nghiệm larviculture. Một khi NHP tình trạng

được xác định cho mỗi phụ nữ bằng cách mô bệnh học và

khẳng định bằng phương pháp PCR và cá nhân tại chỗ, lai

sinh sn được phân loại thành ba nhóm theo

kết quả mô bệnh học: (1) động vật không có dấu hiệu của

NHP nhiễm trùng, (2) động vật bị bệnh nhẹ (cấp 1) và

(3) Các động vật bị nhiễm trung bình (cấp 2). Những Cate

gories được giải thích chi tiết dưới mô bệnh học

phân tích.

Do sự khác biệt lớn trong số các phân tích

phụ nữ giữa các nhóm và sự khác biệt trong num-

lượng các nauplii từ mỗi phụ nữ, nauplii từ cùng một

nhóm đã được gộp lại và phân phối lại theo cách sau:

20.000 nauplii từ đẻ trứng từng được đặt trong một chiếc xe tăng 10-l.

Tuy nhiên, trong nhóm 2 (trung bình NHP), 40.000 nauplii

takenfromeachspawninginordertohaveasufficient

số nauplii. Mẫu được trộn lẫn với nhân tạo

thông khí và tám sao chép từ 20.000 nauplii xuyên

ferred xe tăng larviculture cá nhân 250-l với 200 -

l lọc nước biển (30 ° C và 35 ppt nhiệt độ trung bình

và độ mặn) ở mật độ cuối cùng của 100 nauplii / l. Như vậy, mỗi

groupwasdistributedineight larviculture xe tăng và nuôi

10-ngày postlarvae (PL-10).

Chế độ ăn uống được cung cấp fromnaupliusVstagewas bao gồm

Chaetoceros graciliaris tảo, được quản lý bởi một liên tục

thức ăn độc hại hệ thống kết hợp với một trao đổi nước hàng ngày

30% (Ramirez et al, 1999). Từ zoea giai đoạn III, Artemia

sp. được bao gồm trong chế độ ăn uống. Thương mại thức ăn viên (Micro

thức ăn ® microencapsulate) với 36,7% protein, chất béo 12,7%,

8,3% tro và chất xơ 1%, được cung cấp trong Ngoài Artemia

sp. kể từ Z-II PL-10 giai đoạn. Trong nền văn hóa sự sống còn ấu trùng

zoea II, mysis II, PL1 và PL10, đã được ghi lại cho mỗi

xe tăng.

Ở giai đoạn PL-10, rostrocaudal chiều dài được xác định cho

mỗi bể, phân tích một mẫu của 10 con. Cuối cùng sống sót

được xác định bằng cách đếm tổng số PL-10 trong

số lượng ban đầu của nauplii.

2.4. Căng thẳng thử nghiệm cho ấu trùng

Độ mặn kiểm tra căng thẳng đã được áp dụng cho hai lần lặp lại 50

sinh vật từ mỗi bể larviculture PL-10 giai đoạn.

Tôm post được thả đột ngột chuyển sang các phương tiện truyền thông pha loãng

5pptfor60min, thenbackto35pptseawaterforanother

60 phút. Tỷ lệ sống sót đã được xác định bởi loại trừ

của các sinh vật không di chuyển và chìm sau khi độ mặn

thay đổi. Những sinh vật này được coi là đã chết. Các

ảnh hưởng của các thao tác đã được thử nghiệm bằng cách chuyển PL-10

từ một thùng chứa khác, mà không thay đổi nước

osmolarity (Palacios et al, 1999).

2.5. Sinh hóa phân tích

Mẫu khoảng 50 mg nauplii từ mỗi

sinh sản được tập trung sử dụng một lưới màn hình 100-micron và

ngay lập tức đông lạnh ở -80 ° C để phân tích thêm. Đông lạnh

mẫu của nauplii II trọng và điều chỉnh

100 mg / ml trong dung dịch nước muối đẳng trương vô trùng. Họ

đồng nhất bằng cách sử dụng một Beadbeater (Cole-Parmer Vernon

đồi, IL) và các hạt silica zircone 1-mm. Sau khi centrifuga

tion tại 3000 rpm 10 phút trong một Eppendorf 5415 -

Microcentrifuge C, bề đã được chuyển giao cho một mới

ống và được sử dụng để phân tích enzyme đo màu cho Glu-

cose, cholesterol và triglycerides (GPO-PAP, Merck)

bằng cách sử dụng một hệ thống Vitalab tự động Selectra-2 Hóa học

(Dữ liệu lâm sàng Smithfield, RI).

2.6. Mô bệnh học phân tích

Sau khi đẻ trứng, tất cả các phụ nữ đã hy sinh và

theo chiều dọc sectioned. Một nửa của gan tụy

đã được cố định trong cồn 95% cho phân tích PCR. Các khác

một nửa của tôm được bảo quản trong định hình Davidson

(Humason 1972) trong 72 h, chuyển sang sản xuất ethanol 70%

và xử lý thông thường mô bệnh học (Bell và Lig-

htner, 1988). Tổng cộng 55 mẫu độc lập.

Bảng 1

NHP chẩn đoán và kết quả mô bệnh học của con cái nghiên cứu

Thông số NHP tiêu cực

(Cấp 0)

Nhẹ NHP

(Lớp 1)

Vừa phải

NHP

(Lớp 2)

Gan tụy trung bình 2.0A

1.8a

1.3b

Vacuolization Phạm vi 1-31-31-2

Gan tụy trung bình 0.25a

0.39a

1.1b

39% 25% 75% teo Tần số

Phạm vi 0-10-10-2

PCR dương tính 0 / 23 20/20 12/12

Tại chỗ

lai

tích cực

0 / 23 20/20 12/12

Giá trị với một superscript khác nhau trong cùng một hàng đáng kể

khác nhau được xác định bởi các kỹ thuật tỷ lệ khác nhau với một

mức độ ý nghĩa của Pb0.05.

Mức độ teo gan tụy và vacuolization được xác định

Bell và Lightner (1988).

339 L. F. Aranguren et al. / Nuôi trồng thủy sản 258 (năm 2006) 337-343analyzed: 31 từ khảo nghiệm đầu tiên và 24 từ

thứ hai. Tất cả các mẫu cho thấy các tổn thương u hạt và

xâm nhập trong gan tụy, gợi ý của NHP

nhiễm trùng, cũng được thử nghiệm lai tạo tại chỗ,

sau đây của nhà sản xuất giao thức (DiagXotics Inc,

Wilton, CT) và bằng phương pháp PCR, sử dụng mồi và điều kiện

mô tả trước đây (Brinez et al, 2003).

Mức độ nghiêm trọng NHP được giao nhiệm vụ bằng cách xác định

tỷ lệ phần trăm của ống bị ảnh hưởng trong gan tụy

nghiên cứu động vật. Tổng số ống trong

gan tụy (TT) được xác định cho mỗi con vật.

Ngoài ra, số lượng của ống tán huyết

nốt melanized (HNM) và / hoặc không melanized

(HNN) được ước tính. Tỷ lệ phần trăm của mức độ nghiêm trọng (PS)

được tính như:

PS ¼ ðHNM þ HNN = TTÞ? 100

Các phụ nữ không có dấu hiệu của NHP được phân loại như NHP

tiêu cực. Phụ nữ với PA từ 1% đến 10%

phân loại là loại 1, NHP nhẹ. Con cái từ này

nhóm có nốt haemocytic với chỉ một phần COMPRO

mise của ống. Phụ nữ với PA giữa 11% và

20% được phân loại là loại 2 hoặc NHP vừa phải. Các

gan tụy của những con vật này đã có một số lượng thấp của R

và tế bào B, và cho thấy teo ống lượn. Haemocytic

nốt sần lớn hơn trong nhóm trước và có thể

thỏa hiệp ống nhiều. Trong 3 nhóm, động vật với một

PAbetween 21% và 30% đã được bao gồm và nhóm 4was

xác định cho động vật với PA cao hơn 31%.

Các cấp bậc của các cấp vacuolization và teo trong

gan tụy đã được phân loại như sau: loại 0 tổng số

không có không bào lipid, lớp 1 trường hợp không có chất béo trong

hơn 50% của ống, loại 2 sự vắng mặt của lipid

30-50% của các ống, cấp 3 chỉ ở mức độ trung bình

giảm nội dung của lipid trong các ống và lớp

4 giọt lipid phong phú trong tất cả các ống.

2.7. Phân tích PCR

Mẫu gan tụy cố định đã được rửa sạch bằng

50 μlofTris-EDTA đệm (TE) và ly tâm ở

14.000 rpm trong 5 phút. Mẫu đã được tẩm ướt trong

sự hiện diện của 500 ml của thiocyanate guanidium với

glycogen và ủ ở 60 ° C trong 30 phút. Sau khi

ủ bệnh, 500 ml của isopropanol đã được thêm vào, cẩn thận

trộn bằng cách đảo ngược và ly tâm ở 13.000 rpm trong một

microcentrifuge cho 15 phút. Các bề là dis-

chải thô; viên đã được rửa sạch bằng 1 ethanol 70% ml và

recentrifuged tại 13.000 rpm trong 5 phút. Các bề

các phế và DNA đã được resuspended trong

100 μlofTE.

Phản ứng PCR được thực hiện bằng cách sử dụng sơn lót và

điều kiện mô tả trước đây (Loy et al, 1996).

Amplicon được chạy trong agarose gel dính

ethidium bromide. Khuếch đại của một quản gia

gen được thực hiện một cách riêng biệt trên NHP PCR âm tính

mẫu, mô tả (Brinez et al, 2003).

2.8. Phân tích thống kê

Một cách phân tích phương sai (ANOVA), tiếp theo

một bài kiểm tra so sánh có nghĩa là bất bình đẳng n-hoc Tukey

Graphpad lăng kính phiên bản 4.0 đã được thực hiện để đánh giá

sự khác biệt đáng kể trong hoạt động larviculture

giữa các nhóm và thành phần sinh hóa trong

nauplii.

Bảng 3

Sự khác biệt trong các biến sinh hóa của nauplii II (có nghĩa là ± SE) từ những con cái bị bệnh NHP nhẹ, trung bình và không có

Các thông số sinh hóa NHP tiêu cực, n = 11 nhẹ NHP, n = 7 NHP vừa phải, n = 6

Cholesterol (mg / g) 2,32 ± 2.45a

1,49 ± 0.80a

1,93 ± 0.82a

Glucose (mg / g) 3,35 ± 2.18a

1,77 ± 0.53a

3,22 ± 0.6a

Triglycerides (mg / g) 16,79 ± 7.10a

12,42 ± 4.76a

6,73 ± 3.29b

Triglyceride / cholesterol 8,39 ± 4.80a

5,26 ± 2.83a

5,39 ± 2.46a

Glucose / cholesterol 1,82 ± 1.87a

1,51 ± 0.88a

1,79 ± 0.60a

Giá trị với một superscript khác nhau trong cùng một hàng là đáng kể khác nhau (Pb0.05).

Bảng 2

Sản xuất và các biến morphometric (có nghĩa là ± độ lệch chuẩn) trong mối quan hệ NHP bệnh ở spawners phụ nữ

Các thông số sản xuất NHP tiêu cực, n = 23 NHP nhẹ, n = 20 NHP vừa phải, n = 12

Spawner trọng lượng trung bình (g) 47,0 ± 4.9a

46,0 ± 6.0a

44 ± 3.8a

Trứng / nữ (× 103

) 193,4 ± 80.4a

183,4 ± 94.3a

122,3 ± 75.1b

Nauplii / nữ (× 103

) 162,9 ± 61.1a

164,1 ± 70.8a

102,4 ± 41.1b

Nauplii / trứng × 100 84,2 ± 9.1a

84,9 ± 11.6a

83,8 ± 12.4a

Giá trị với một superscript khác nhau trong cùng một hàng là đáng kể khác nhau (Pb0.05).

340 L. F. Aranguren et al. / Nuôi trồng thủy sản 258 (2006) 337-343Analysis của hiệp phương sai (ANCOVA) được sử dụng để

phân tích tác động chính và tương tác của các trọng lượng nữ

các thông số khả năng sinh sản. Đối với mục đích này, số lượng

trứng và nauplii mỗi phụ nữ và tỷ lệ nở

đã được sử dụng như các biến phụ thuộc, điều chỉnh cho

trọng lượng của spawner nữ. Các thử nghiệm cho thống kê

ý nghĩa đã được thiết lập tại Pb0.05.

Bảng dự phòng và tỷ lệ khác biệt

kỹ thuật (Gravetter và Wallnau, 1991) đã được sử dụng

để so sánh các kết quả mô học trong

nhóm khác nhau NHP.

3. Kết quả

Sự tồn tại trong nền văn hóa cá bố mẹ (từ commer

cial giai đoạn) trong ao bị ảnh hưởng NHP là 12,5%, thấp hơn

hơn so với ao sống còn cho các ao cá bố mẹ không bị ảnh hưởng

rằng trang trại (50-60%). Ngoài ra, tỷ lệ tử vong trong quá trình chuyển giao

và sự thích nghi là 20%, cao hơn đáng kể so với

các quần thể cá bố mẹ khỏe mạnh (Ricardo Riano, mỗi

Sonal truyền thông). Dấu hiệu lâm sàng của triệu chứng

động vật bao gồm ruột trống rỗng, vỏ mềm, các cơ quan trạng thái bình thường

và mở rộng các tế bào sắc tố đỏ trong pleopods và

uropods (Lightner, 1996).

Trong số 55 phụ nữ đánh giá, 23 (41,8%) không có

bằng chứng của tổn thương NHP, 20 (36,4%) đã có dấu hiệu của NHP

loại 1 và 12 (21,8%) cho thấy các tổn thương NHP cấp 2.

Không có loài động vật được tìm thấy với các tổn thương NHP nghiêm trọng (điểm

3-4). NHP chẩn đoán cũng được xác nhận bằng phương pháp PCR và

lai tạo tại chỗ trong tất cả các trường hợp dương tính (Bảng 1).

Theo dự kiến, vacuolization của gan tụy

thấp hơn đáng kể ở phụ nữ với NHP cấp 2

hơn so với tôm loại 1 và tiêu cực cho NHP

(Sự khác biệt kỹ thuật tỷ lệ zb0.05) mỗi

centage của teo gan tụy cũng có ý nghĩa

lý cao hơn ở phụ nữ với loại 2 hơn so với hai

nhóm (Bảng 1). Teo này là do giảm

NHP âm NHP NHP nhẹ vừa phải

5,0

5,5

6,0

6,5

7,0

7,5

8,0

đường khổ tấm vải

NHP bệnh

PL 10 Chiều dài (mm)

Hình 2. Rostrocaudal chiều dài đo tại PL-10 giai đoạn trong NHP tiêu cực

và NHP tích cực phụ nữ. Mỗi biểu tượng đại diện cho chiều dài trung bình

10 postlarve. Nghĩa là chia sẻ một bức thư thông thường là không đáng kể

khác nhau tại P = 0,05 Tukey thử nghiệm kiểm tra bất bình đẳng N-hoc sau khi

unifactorial ANOVA.

Hình 1. Ấu trùng sống sót từ con cái NHP tiêu cực, nhẹ và bệnh NHP vừa. Sống sót được đánh giá ở các giai đoạn khác nhau trong larviculture

và sau khi kiểm tra căng thẳng thẩm thấu tại PL-10. Điền thanh: NHP tiêu cực, vượt qua thanh: nhóm 1 (nhẹ NHP), quán bar chấm: nhóm 2 (NHP vừa phải). Phương tiện

chia sẻ một bức thư thông thường là không đáng kể khác nhau tại P = 0,05 Tukey thử nghiệm để kiểm tra bất bình đẳng N-hoc sau khi ANOVA unifactorial. Dọc các quán bar

đại diện có nghĩa là ± S.D.

341 L. F. Aranguren et al. / Nuôi trồng thủy sản 258 (năm 2006) 337-343in số của R và B-tế bào gan tụy của

ảnh hưởng đến tôm.

Sinh sản các thông số như số lượng trứng mỗi

đẻ trứng, số lượng nauplii và tỷ lệ nở từ

ba nhóm spawners nữ được thể hiện trong

Bảng 2. Khả năng sinh sản (trứng và nauplii mỗi đẻ trứng)

thấp hơn đáng kể ở phụ nữ với các loại bệnh NHP 2

so với NHP NHP tiêu cực hoặc bệnh nhẹ

(Lớp 1) (Pb0.05). Điều này giảm trong số lượng

nauplii là do giảm số lượng trứng,

một khi chúng ta tìm thấy không có sự khác biệt trong tỷ lệ nở

giữa các nhóm phân tích.

Mức Triglyceride trong nauplii II (Bảng 3)

cao hơn đáng kể ở phụ nữ NHP tiêu cực hơn trong

phụ nữ với lớp 2 NHP (Pb0.05), trong khi có

không có sự khác biệt giữa NHP tiêu cực và lớp 1

con cái. Không có sự khác biệt đáng kể nào được tìm thấy

glucose và mức cholesterol trong nauplii giữa ba

nhóm. Tỷ lệ cholesterol Triglyceride (TG / C) và

tỷ lệ cholesterol glucose (G / C) cũng không bị ảnh hưởng

bệnh NHP ở phụ nữ (Bảng 3).

Hình 1 cho thấy tỷ lệ sống sót trong thời gian khác nhau

ấu trùng giai đoạn. Thật thú vị, chúng tôi không tìm thấy sự khác biệt trong

tồn tại ở I zoea, mysis I, PL-1 và PL-10 cho ba

nhóm. Tuy nhiên, sau khi kiểm tra căng thẳng độ mặn, PL-10

sự sống còn giảm đáng kể trong ấu trùng từ NHP

phụ nữ tích cực, cả hai lớp 1 và lớp 2 (Hình 1). Tương tự,

giảm đáng kể trong PL 10 dài cũng được quan sát

trong các thế hệ con cháu của những phụ nữ (lớp 1 và lớp 2) (Hình 2).

4. Thảo luận

Giảm lượng thức ăn chăn nuôi, các tổn thương u hạt và

teo trong gan tụy mô tả bệnh NHP.

Những dấu hiệu lâm sàng và histopathogical có thể làm thay đổi lipid

trao đổi chất, có thể được phản ánh trên sinh sản

các thông số. Điều tra sự tồn tại của correla

tion, chúng tôi đã nghiên cứu 23 phụ nữ mà không có NHP bệnh và 32

phụ nữ với lớp 1 và 2 NHP. Trong thực tế, chúng tôi đã không tìm thấy

bất kỳ phụ nữ bị bệnh NHP nặng (lớp 3-4). Các

không có con cái bị ảnh hưởng nghiêm trọng có thể là do

tỷ lệ tử vong cao trong giai đoạn cuối cùng của văn hóa, sự căng thẳng

gây ra bởi các chuyển từ nông trại đến phòng thí nghiệm trưởng thành

eyestalk quá trình cắt bỏ vì những con vật này

rất dễ bị thao tác. Ngoài ra, nghiêm trọng

thiệt hại gan tụy có thể không tương thích với

trưởng thành và sinh sản, bởi vì buồng trứng cần phải

đạt được một mức nhất định của dự trữ lipid tomature và sinh sản.

Theo dự kiến, khả năng sinh sản nữ bị ảnh hưởng bởi NHP

bệnh. Chúng tôi tìm thấy một mối tương quan nghịch đảo giữa

cấp của bệnh và số lượng của trứng và nauplii mỗi

nữ. Tuy nhiên, tỷ lệ nở được không đáng kể

khác nhau trong các loài động vật NHP tiêu cực và tích cực,

nở mà cũng bị ảnh hưởng bởi khác

các yếu tố như chất lượng tinh trùng nam giới và điều kiện trưởng thành

(Palacios và Racotta, 2003).

Phụ nữ mắc bệnh NHP lớp 2 cho thấy một

cao hơn đáng kể mức độ teo gan tụy

so với hai nhóm khác. Mặt khác,

gan tụy vacuolization thấp hơn đáng kể

loại 2 phụ nữ, cho thấy sự suy giảm trong lưu trữ lipid. Các

giảm contentwas lipid cũng được tìm thấy trong các thế hệ con cháu của

NHP phụ nữ bị ảnh hưởng. Triglyceride cấp trong nauplii II

đã giảm đáng kể trong NHP nữ tích cực

con cái. Vì vậy, kết quả của chúng tôi là phù hợp với

trước đây báo cáo cho thấy rằng bố mẹ sinh lý

trạng thái có thể được suy ra bởi mức độ TG trong trứng và nauplii

(Lavens và Sorgeloos, năm 1991; Cahu et al, 1995).

Triglycerides được coi là quan trọng nhất

nguồn năng lượng để tạo phôi và ấu trùng sớm

phát triển, tương quan trực tiếp với trứng và

nauplii chất lượng (Fraser, năm 1989; Lavens và Sorgeloos,

Năm 1991; Ouellet et al, 1992). Trong nghiên cứu này, chúng tôi thấy rằng

NHP bệnh ở phụ nữ và ở mức độ thấp TG trong

nauplii đã có một tác động tiêu cực đến hiệu suất ấu trùng.

Ấu trùng tăng trưởng, được xác định bởi chiều dài ở giai đoạn PL-10,

cao hơn đáng kể trong nhóm tiêu cực NHP

so với mỗi nhóm tích cực NHP.

Như đã mô tả cho sự phát triển của ấu trùng, PL-10 sống sót sau khi

căng thẳng thử nghiệm đã được thẩm thấu cao hơn đáng kể trong NHP

tiêu cực con,. Kiểm tra độ mặn thấp căng thẳng này trên PL

đã được sử dụng rộng rãi cho dự đoán của ấu trùng perfor

mance trong thả (Fegan, 1992). Sống sót

kiểm tra độ mặn căng thẳng phụ thuộc vào các osmoregulatory

khả năng của ấu trùng, lần lượt là liên quan với

bài viết mang ấu trùng phát triển (Charmantier et al, 1988;

Samocha et al, 1998). Kết quả của chúng tôi cho thấy một quan trọng

và mối tương quan tích cực giữa sự sống còn căng thẳng và thử nghiệm

PL-10 chiều dài (r = 0,73). Thật vậy, mối tương quan tích cực

phù hợp với công việc trước đây về sinh sản

kiệt sức (Palacios et al, 1999;. Racotta et al, 2004).

Mặc dù chúng tôi quan sát thấy rằng bệnh NHP tiêu cực

bị ảnh hưởng sống còn căng thẳng thử nghiệm và PL-10 chiều dài, chúng tôi không

tìm thấy một mối tương quan giữa NHP và sự tồn tại tại khác nhau

giai đoạn trong quá trình larviculture. Kết quả này bất ngờ có thể

cho thấy dự trữ chất béo trong trứng và nauplii

quan trọng đối với tăng trưởng và phát triển mà cho cuối cùng

ấu trùng sống sót.

Chúng tôi cũng phải đưa vào tài khoản thực tế là ấu trùng

NHP phụ nữ tích cực có thể bị nhiễm NHP

thông qua lây truyền dọc. Trong thực tế, một tỷ lệ cao

xe tăng larviculture, từ những con cái NHP tích cực,

PCR dương tính cho thấy truyền theo chiều dọc trong của chúng tôi

nghiên cứu (bản thảo để chuẩn bị), do đó, tiêu cực

342 L. F. Aranguren et al. / Nuôi trồng thủy sản 258 (năm 2006) 337-343effect của NHP quan sát thấy trong sự phát triển của ấu trùng và kiểm tra căng thẳng

sự tồn tại có thể là do mức giảm trong triglyce

cưỡi hoặc NHP bệnh ấu trùng hoặc sự kết hợp của

cả hai.

5. Kết luận

Hoại tử hepatopancreatitis gây ra sự suy giảm

điều kiện sinh lý của con cái giống bố mẹ. Nó

có thể được phản ánh bởi sự suy giảm khả năng sinh sản và / hoặc

suy giảm trong nauplii và chất lượng ấu trùng. Larviculture

NHP phụ nữ bị ảnh hưởng trong một chung thấp hơn

ấu trùng hiệu suất, theo ước tính của tăng trưởng trong quá trình ấu trùng

văn hóa và sự sống còn một bài kiểm tra căng thẳng độ mặn tại PL-10.

Lời cảm ơn

Hỗ trợ cho nghiên cứu này được cung cấp bởi Colcien

cias không có hợp đồng. 293-2003. Các tác giả muốn

cảm ơn Sergio Martinez cho việc cung cấp các loài động vật,

Ricardo Riaño và Jaime Faillace giúp đỡ của họ trong

trưởng thành và larvicultura, Tiến sĩ Eduardo Rueda cho mình

giúp phân tích sinh hóa, và Tiến sĩ Clarissa Granja

đánh giá quan trọng của bản thảo.

Tài liệu tham khảo

Aguirre-Guzmán, G., Ascencio-Valle, F., năm 2000. Bệnh truyền nhiễm trong

loài tôm với nuôi trồng thủy sản tiềm năng. Phẫn nộ Res. Devl.

Vi sinh vật 4, 333-348.

Bell, T.A., Lightner, D.V., 1988. Sổ tay của Penaeid bình thường

Tôm Mô học. Xuất bản đặc biệt của Thế giới Thuỷ sản

Xã hội, Baton Rouge, LA.

Brinez, B., Aranguren, L.F., Salazar, M., 2003. Mẫu phân là DNA

nguồn cho việc chẩn đoán hepatopancreatitis hoại tử (NHP)

Penaeus tôm thẻ chân trắng bố mẹ. Dis. Aquat. Org. 55, 69-73.

Cahu, C.L., Cuzon, G., Quazuguel, P. năm 1995. Ảnh hưởng của cao

các axit béo không bão hòa, một-tocopherol và acid ascorbic thành bầy đàn

cổ phần chế độ ăn uống trên thành phần trứng và phát triển của Penaeus

indicus. Comp. Biochem. Sinh lý. 112, 417-424.

Charmantier, G., Charmantier-Daures M., Bouaricha, N., Thuet, P.,

Aiken, D.E., Trilles, J.P., 1988. Ontogeny của osmoregulation

khoan dung độ mặn trong hai loại thập túc động vật giáp xác: Homarus Amer

icanus và Penaeus japonicus. Biol. Bull. 175, 102-110.

Fegan, D.F. năm 1992. Phát triển gần đây và các vấn đề trong các penaeid

ngành công nghiệp sản xuất giống tôm. Trong: Wyban, J. (Ed.), Căn cứ của

Phiên họp đặc biệt về nuôi tôm. Thế giới Thuỷ sản

Xã hội, Baton Rouge.

Fraser, A.J. năm 1989. Triacylglycerol nội dung như là một chỉ số điều kiện để

cá, hai mảnh vỏ, ấu trùng giáp xác. Có thể. J. cá. Aquat. Khoa học viễn tưởng. 46 tuổi,

1686-1873.

Frelier, PF, Sis, RF, Bell, TA, Lewis, DH năm 1992. Kính hiển vi và

nghiên cứu siêu hepatopancreatitis hoại tử ở Texas

nuôi tôm (Penaeus vannamei). Vet. Pathol. 29, 269-277.

Gravetter, P., Wallnau, T.S. năm 1991. Thống kê cho các hành vi

Khoa học, ấn bản thứ ba. Tây xuất bản St Paul, Minnesota.

Humason, G.L., 1972. Kỹ thuật mô động vật, lần 3. W.H.

Freeman và Công ty, San Francisco, CA.

Lavens, P., Sorgeloos, P., năm 1991. Sự khác nhau về trứng và chất lượng ấu trùng trong

cá và các loài giáp xác khác nhau. In: Lavens, P. Sorgeloos, P.,

Jaspers, E., Ollevier, F. (eds.), 91 Ấu trùng cá và giáp xác

Larviculture SymposiumEuropean Nuôi trồng thủy sản xã hội, đặc biệt

Xuất bản, Vol. 15, trang 221-222. Tháng Tám.

Lightner, D.V. năm 1996. Sách hướng dẫn của Bệnh học và chẩn đoán

Thủ tục cho bệnh của tôm Penaeid. Thế giới Nuôi trồng thủy sản

Xã hội, Baton Rouge. L.A.

Loy, JK, Dewhirst, FE, Weber, W., Frelier, PF, Templeton, JW,

Năm 1996. Phát sinh học phân tử và phát hiện tại chỗ của bệnh nguyên

đại lý của hoại tử hepatopancreatitis trong tôm. Appl. Môi trường.

Microbiol. 62 tuổi, 3439-3445.

Ouellet, P., Taggart, C.T., Frank, K.T. năm 1992. Lipid điều kiện và

Tỷ lệ sống sót ở ấu trùng boreales tôm Pandalus. Có thể. J. cá. Aquat.

Khoa học viễn tưởng. 49, 368-378.

Palacios, E., Racotta, S.I. năm 2003. Hiệu lực của số spawns

kết quả chất lượng sinh sản của 1-năm-tuổi-ao nuôi Penaeus

tôm thẻ chân trắng (Boone) bố mẹ. Aquac. Res. 34, 427-435.

Palacios, E. Perez-Rostro CI, Ramirez, JL, Ibarra, AM, Racotta, IS,

Năm 1999. Kiệt sức sinh sản tôm (Penaeus vannamei)

phản ánh trong thành phần sinh hóa, ấu trùng sống sót, và tăng trưởng.

Nuôi trồng thủy sản 171, 309-321.

Racotta, SI, Palacios, E., Hernandez-Herrera, R., Bonilla, A., Perez-

Rostro, C.I., Ramirez, J.L., năm 2004. Tiêu chuẩn đánh giá ấu trùng và

postlarval chất lượng của Thái Bình Dương tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus vannamei),

Boone, 1931. Nuôi trồng thủy sản 233, 181-195.

Ramirez, J.L., Avila, S., Ibarra, sáng năm 1999. Tối ưu hóa của thức ăn gia súc trong

hai sinh vật lọc thực phẩm với việc sử dụng của một thực phẩm thấp liên tục

tập trung, hệ thống nông nghiệp nhỏ giọt. Aquac. Eng. 20, 175-189.

Samocha, TM, Guajardo, H., Lawrence, AL, Castille, FL, tốc độ,

M., McKee, D.A., Trang, K.I. năm 1998. Một bài kiểm tra căng thẳng đơn giản cho

Penaeus vannamei postlarvae. Nuôi trồng thủy sản 165, 233-242.

Teshima, SI, Kanazawa, A., Koshio, S., Horinouchi, K., 1989. Lipid

quá trình trao đổi chất của các tôm Penaeus japonicus trong quá trình trưởng thành:

sự thay đổi trong hồ sơ lipid của buồng trứng và gan tụy. Comp.

Biochem. Sinh lý. 92B, 45-49.

Wouters, R., Gomez, L., Lavens, P., Calderon, J., 1999. Thức ăn

Artemia sinh khối Penaeus Vannamei bố mẹ:

ảnh hưởng đến năng suất sinh sản và chất lượng ấu trùng. J. động vật có vỏ

Res. 18, 651-656.

Wouters, R., Lavens, P., Nieto, J., Sorgeloos, P. năm 2001. Penaeid tôm

bố mẹ dinh dưỡng: một sự xem xét cập nhật trên nghiên cứu và

phát triển. Nuôi trồng thủy sản 202, 1-21.

343 L. F. Aranguren et al. / Nuôi trồng thủy sản 258 (năm 2006) 337-343