Sinh lý và đáp ứng miễn dịch của tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus vannamei)

bị nhiễm với hoại tử hepatopancreatitis vi khuẩn

Luz Ang'elica 'Avila-Villa, Diana Fimbres-Olivarria, Guillermina Garc'ıa

S 'anchez, Teresa Gollas-Galv'an, Jorge Hern'andez-L'opez, Marcel Mart'ınez

Porchas

PII: S0044-8486 (11) 00698-3

DOI: doi: 10.1016/j.aquaculture.2011.09.010

Tham khảo: AQUA 629866

Để xuất hiện trong: Nuôi trồng thủy sản

Nhận được ngày 08 tháng 8 năm 2011

Sửa đổi ngày: 01 Tháng 9 2011

Chấp nhận ngày: 05 Tháng Chín 2011

Xin vui lòng ghi rõ bài viết này như: 'Avila-Villa, Luz Ang' elica, Fimbres-Olivarria, Diana,

Garc 'IA-S' anchez, Guillermina, Gollas-Galv một, Teresa, giống cò andez-L 'opez, Jorge, "Inez Mart

Porchas, Marcel, phản ứng sinh lý và miễn dịch của tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus van-

namei) bị nhiễm với vi khuẩn hoại tử hepatopancreatitis, nuôi trồng thủy sản (2011), đổi:

10.1016/j.aquaculture.2011.09.010

Đây là một tập tin PDF của một bản thảo chưa được chỉnh sửa đã được chấp nhận để xuất bản.

Là một dịch vụ cho khách hàng của chúng tôi, chúng tôi đang cung cấp phiên bản đầu tiên của bản thảo.

Bản thảo viết tay sẽ trải qua quá trình biên tập bản thảo, sắp chữ, và xem xét các bằng chứng kết quả

trước khi nó được xuất bản dưới hình thức cuối cùng của nó. Xin lưu ý rằng trong quá trình sản xuất

lỗi có thể được phát hiện có thể ảnh hưởng đến nội dung, và tất cả các quy phạm pháp luật từ bỏ mà

áp dụng cho các tạp chí liên quan.

Bản thảo

Sinh lý và đáp ứng miễn dịch của tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus

tôm thẻ chân trắng) bị nhiễm hoại tử vi khuẩn hepatopancreatitis.

Tác giả:

Luz Angélica Ávila-Villa

một

, Diana Fimbres-Olivarria

một

, Guillermina García-Sánchez

một

,

Teresa Gollas-Galvána *

, Jorge Hernandez-Lopez

, Marcel Martínez-Porchas

một

một

Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo de, AC Departamento

Tecnología de Alimentos de Origen động vật. Đường La Victoria km 0,6 Z.C. 83304,

Hermosillo, Sonora, Mexico.

CHẤP NHẬN M

Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste. Hermosillo, Sonora, Mexico.

*

Tương ứng với tác giả. Email: [email protected]

Một R S B T A T C

Một ngày dùng thử mười tám được thực hiện để đánh giá ảnh hưởng của hoại tử

hepatopancreatitis (NHP) bệnh về sinh lý, dinh dưỡng và miễn dịch

tình trạng của người lớn tôm chân trắng (Litopenaeus vannamei).Tôm được chia thành bị nhiễm bệnh

và nhóm không bị nhiễm bệnh, tôm bị nhiễm bệnh được cho ăn với homegenates gan tụy

tích cực NHP vi khuẩn, trong khi tôm bị nhiễm không được cho ăn gan tụy khỏe mạnh. Không có sự khác biệt đáng kể đã được quan sát đường, protein,

acylglicerides, cholesterol, ammonia và nồng độ urê trong haemolymph. Tuy nhiên,

mức độ lactate tăng 95% tôm bị nhiễm bệnh so với tôm không nhiễm

18

 tiêm chủng ngày bưu điện; tương tự, mức độ nitrit trong tôm nhiễm bệnh tăng đáng kể

141% và 66% ở 15

 và 18

 ngày tương ứng. Phenoloxidase tổng số và ANUSCRIPT

hoạt động phenoloxidase của tôm bị nhiễm bệnh tăng lên đáng kể tại 7

 ngày bài

tiêm chủng, trong khi không có sự khác biệt đáng kể đã được phát hiện prophenoloxidase và

tổng hemocyte tính. Hoạt động kháng khuẩn giảm trong tôm bị nhiễm bệnh tại 15

 ngày

bài tiêm chủng. Tổng số proteinase, trypsin và quimotrypsin các hoạt động tăng lên sau khi 15

ngày, kể từ ngày tiêm chủng trong tôm bị nhiễm bệnh, tuy nhiên hoạt động trypsin và quimotrypsin

trở về mức ban đầu của họ sau 18 ngày kể từ ngày. Kết quả cho thấy rằng tôm duy trì một

homeostasis tình trạng ở hầu hết các thông số theo dõi, trong khi những người khác đã được sửa đổi và

trở về mức ban đầu của họ, cho thấy rằng tôm có thể chịu được bệnh trong khi

giai đoạn đầu bằng cách thực hiện các thay đổi sinh lý và sinh hóa khác nhau trong MAN CHẤP NHẬN

Để duy trì cân bằng nội môi (nói chung thích ứng với hội chứng).

Từ khóa:

Tình trạng miễn dịch, thử nghiệm bị nhiễm trùng, hoại tử hepatopancreatitis, sinh lý

tôm, tình trạng bệnh tật, căng thẳng.

1. Giới thiệu

Nuôi tôm đã bị ảnh hưởng bởi một sự đa dạng của các bệnh do virus gây ra và

vi khuẩn có bị đe dọa tính bền vững của hoạt động (Martínez-Cordova et

al, 2009). Đặc biệt, vi khuẩn hepatopancreatitis hoại tử (NHPB) đã đánh

sản xuất của trang trại thương mại trong suốt 20 năm qua.

Các nghiên cứu khác nhau đã được thực hiện để làm sáng tỏ sự năng động lây lan của

vi khuẩn (Avila-Villa et al., 2011), quá trình lây nhiễm (Gracia-Valenzuela et al., 2011)

và hiệu quả vào sự toàn vẹn và sự sống còn của tôm (Frelier et al, 1992;. Vincent và

Lotz, 2005). Các nghiên cứu khác đã được tập trung vào nghiên cứu các giải pháp để tiêu diệt

vi khuẩn (Vincent và Lotz, 2007).

 Bản thảo

Vincent và Lotz (2005) cho thấy tỉ lệ chết hàng loạt xảy ra chỉ sau 16-20 ngày

từ nhiễm trùng ban đầu, một số dấu hiệu bệnh khác bao gồm phòng giảm tiêu thụ thực phẩm,

bộ xương ngoài trạng thái bình thường, gan tụy màu vàng xuất hiện, hôn mê và chậm phát triển

(Aranguren et al, 2006). Tuy nhiên, một tác dụng đo lường được về sinh lý và

dinh dưỡng thực hiện tôm bị nhiễm bệnh trong giai đoạn đầu tiên của bệnh vẫn còn

không rõ.

Về vấn đề này, Aranguren et al (2006) thực hiện các phương pháp tiếp cận đầu tiên và duy nhất

hiểu được ảnh hưởng của NHPB về việc thực hiện sinh lý của tôm thẻ chân trắng.

Phân tích mô bệnh học cho thấy phụ nữ tôm bị nhiễm NHPB cho thấy

tổn thương mô và đã giảm đáng kể trong số lượng trứng và nauplii sản xuất, CHẤP NHẬN M

hơn nữa, những nauplii cho thấy giảm đáng kể nồng độ chất béo trung tính. Các tác giả

giả định rằng NHP có thể có một tác động tiêu cực về tình trạng sinh lý của người lớn

phụ nữ, nhưng họ chỉ dựa trên kết quả khả năng sinh sản.

Thành phần Haemolymph đã được sử dụng rộng rãi như các thông số để theo dõi

tình trạng sinh lý, dinh dưỡng và miễn dịch của động vật giáp xác có tiếp xúc với những căng thẳng đa dạng

(Cuzon et al, 1980; Stuck và cộng sự, 1996; Hall và Văn Ham năm 1998, Porchas-Cornejo et al.

2011; Matozzo et al, 2011) bao gồm cả những thách thức bệnh..Việc thay đổi ở các cấp độ

một số thông số haemolymph thường do căng thẳng hoặc trục trặc cơ quan

(Boonyaratpalin et al, 2001.), Đặc biệt, tôm gan tụy là cơ quan mục tiêu

NHPB. Xét rằng gan tụy đóng vai trò quan trọng trong các quá trình tiêu hóa, nó có thể được đưa ra giả thuyết rằng bổ sung các thông số haemolymph, các hoạt động của tiêu hóa

enzyme có trong gan tụy cũng có thể bị ảnh hưởng.

Bản thảo

Mục đích của thí nghiệm này là để đánh giá hiệu quả của nhiễm trùng NHPB

sinh lý học, miễn dịch và tình trạng dinh dưỡng của tôm thẻ chân trắng trưởng thành (Litopenaeus

vannamei).

2. Vật liệu và phương pháp

Tôm vị thành niên đã được duy trì theo các điều kiện phòng thí nghiệm sau đây: nhân tạo

eawater, độ mặn 35 ‰, oxy hòa tan ~ 7 mg L-1

, Liên tục nhiệt độ 27 º C,

eeding ăn tự do quảng cáo và trao đổi nước hàng ngày của 80%.Không tiêu thụ thực phẩm và phân

đã được gỡ bỏ bằng cách hút phía dưới của xe tăng.

CHẤP NHẬN M

2,1 NHPB cấy

Inoculums vi khuẩn được thu được từ tôm khỏe mạnh được tiêm

gan tụy homogenates có kết quả tích cực để NHPB.

Tôm bị nhiễm bệnh đã được đóng góp bởi các Comité de Sanidad Acuícola de Sonora

(COSAES). Các sinh vật được chia cắt và gan tụy (HP) được đặt trong một

microtube với 300 ml dung dịch muối và 300 ml của glycerol, HP là

đồng nhất ở 5 º C và được lưu trữ ở -20 º C.

 2,2 Thử nghiệm

Tổng cộng là 240 tôm đã được tuỳ tiện chia thành hai nhóm khác nhau; 160

sinh vật được xem xét để điều trị và 80 để kiểm soát. Mỗi nhóm

chia nhỏ thành các đơn vị có chứa 20 tôm trong 40 thùng nhựa L.

Tôm từ nhóm điều trị đã được ép ăn với 40 ml cấy (Gracia

Valenzuela et al, 2011). Về kiểm soát tôm, họ được cho ăn bằng vũ lực với 40 ml

homogenates gan tụy khỏe mạnh.

Bản thảo

Sự hiện diện của NHPB tôm trong thời gian thử nghiệm đã được phát hiện trong phân

và tôm chết bởi các phản ứng chuỗi polymerase. DNA được chiết xuất bằng cách sử dụng

GENECLEAN SPIN kit (Qbiogene

®). Mồi cụ thể được thiết kế xem xét

trình tự GenBank U65509: NHP/F2: 5'-CGT TGG AGG TTC GTC CTT CAG T-3,

NHP/R2: 5'-GCC ATG AGG ACC TGA CAT CAT C-3. Một bộ dụng cụ PCR (Promega, Corp

Mỹ) đã được sử dụng để phân tích các mẫu theo các điều kiện sau đây: một chu kỳ 95 º C

- 5 phút, 35 chu kỳ 94 º C - 1 phút, 60 º C - 1 phút, 72 º C - 1 phút, và một chu kỳ cuối cùng ở 72

º C - 10 phút. Các sản phẩm PCR được phân tích bằng điện di trong gel agarose 2% và

amplicon đã được quan sát thấy thông qua một transilluminator UV thích nghi với một máy ảnh kỹ thuật số

Gel-Logic 100 hình ảnh hệ thống (KODAK). Các sản phẩm PCR đã được tinh chế bằng cách sử dụng một PCR CHẤP NHẬN M

thanh lọc bộ QIAquick ® (Qiagen) sau các chi tiết kỹ thuật của nhà sản xuất và

gửi đến một phòng thí nghiệm chuyên ngành (Centro de Investigaciones Sobre Enfermedades

Infecciosas, Mexico [CISEI]) được giải mã.

2,3 lấy mẫu

Mẫu Haemolymph từ tôm được thu thập mỗi bốn ngày bằng cách thực hiện

phương pháp mô tả bởi Vargas-Albores et al. (1993). Ba mươi tôm hai được coi là

từ việc điều trị và 16 khỏi sự kiểm soát cho mỗi ngày lấy mẫu (4 tôm · bể-1

). Các

gan tụy của tôm như được trích xuất và được lưu trữ để phân tích thêm

enzyme hoạt động. Chỉ số hepatosomatic được tính như (HSI) = 100 × (gan trọng lượng / trọng lượng cơ thể)

2,4 Haemolymph phân tích

Haemolymph tập trung của tổng số protein, acilglycerides, glucose, cholesterol và

hemocytes ước tính bằng cách thực hiện các phương pháp được mô tả bởi Hernández-López bản thảo

(2001). Nồng độ urê và amoniac được xác định bởi việc sử dụng bộ dụng cụ thương mại

của Randox (Randox Laboratories). Nồng độ Nitrite được theo dõi bằng phương pháp

được mô tả bởi Hernández-López và Vargas-Albores (2003) với những điều sau đây

sửa đổi: 50 ml hỗn hợp (1:1 v / v) của giải pháp Griess A (2% sulfanilamide 5%

H2PO4) và 0,2% N-(naftil) ethylenediamine đã được thêm vào 150 ml của haemolymph.

Sau đó, mẫu được ủ trong 10 phút và đo ở 540 nm.

Phenoloxydase (PO) và phenoloxydase tổng (tổng PO) hoạt động trong haemolymph

ước tính bằng phương pháp phù hợp để mô tả microplate Hernández-López et al.

(1996) và Hernández-López (2001). Để đo hoạt động PO, sự hình thành của

dopachrome từ L-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) tại 492 nm được theo dõi, và

tổng số hoạt động PO đã được phát hiện bằng cách sử dụng trypsin bò kích hoạt. CHẤP NHẬN

Các hoạt động prophenoloxydase (proPO) ước tính phù hợp với những điều sau đây

công thức sau: proPO = tổng số PO-PO (Gollas-Galvan et al 1999). Hoạt động PO được thể hiện

cụ thể hoạt động tương ứng với sự thay đổi trong hấp thụ min-1

 mg-1

 protein tổng số.

Một đơn vị hoạt động enzyme tương đương tăng 0,001 trong hấp thụ

(Söderhäll và Hall, 1984). Các hoạt động kháng khuẩn của hemocytes và protein tổng

nội dung đã được xác định từ một lysate hemocyte, để có được những lysate, 1 ml

heamolymph được ly tâm trong 10 phút tại 700 xg và 4 º C, sau đó, các bề

bị loại bỏ và các hemocytes kết tủa được rửa sạch bằng SIC-EDTA (NaCl 450

mM, KCl 10 mM HEPES 10 mM EDTA 10 mM ở pH 7.3). Các bề

loại bỏ và kết tủa được resuspended trong 40 ml nước cất ba.Cuối cùng, hoạt động kháng khuẩn được đo bằng cách làm theo phương pháp tài liệu

Vaseeharan và Rammasamy (2003).

2,5 enzyme tiêu hóa phân tích

Bản thảo

Sau khi bóc tách, HP đã được đồng nhất với bộ đệm Tris-HCl 50mm tại một tỷ lệ 01:04

(W / v) và ly tâm ở 10.000 xg và 4 º C trong 30 phút. Kết tủa bị loại bỏ

và các bề chứa chiết xuất enzyme đã được lưu trữ ở -20 o C để tiếp tục

phân tích enzyme cụ thể.

Tổng số hoạt động proteinase được ước tính theo phương pháp được đề xuất bởi Garcia-Carreño

(2002) với các sửa đổi sau đây: 20 ml chiết xuất các enzym được trộn với

240 ml của bộ đệm Tris-HCl (50mm; pH 7.5). Sau đó, 500 ml của azocasein 2%

thêm vào và ủ trong 10 phút ở nhiệt độ phòng, sau khi ủ bệnh, phản ứng

dừng lại với 500 ml axit tricloaxetic 20% (TCA) và ủ trong 5 phút tại phòng

nhiệt độ. Cuối cùng, giải pháp đã được ly tâm ở 6500 xg trong 5 phút và M CHẤP NHẬN

hấp thụ của bề được đo ở 450 nm. Hoạt động này được thể hiện như sau:

MU = Abs450nm/min/mg của protein.

Hoạt động trypsin được ước tính theo phương pháp được đề xuất bởi García-Carreño (1994), sử dụng

Benzoil-Arg-p-nitroanilide (BAPNA) như chất nền. Để đo hoạt động, 20 ml của

trích xuất các enzyme đã được thêm vào 200 ml bề mặt, và hấp thụ được đọc trong một

microplate ở 37 º C. Trypsin hoạt động được ước tính bằng phương trình sau đây:

[(Abs450nm/min X 1000 X ml phản ứng / (8800 x mg protein), nơi thường xuyên 8800

là hệ số sự tuyệt chủng của p-nitroanilide. Các hoạt động được thể hiện trong các đơn vị như MU =

Abs450nm/min/mg protein.

Hoạt động Quimotrypsin được xác định bằng cách sử dụng Succinil-(ALA) 2-Pro-Phe-p-nitroanilide

(SAPNA) là chất nền theo với García-Carreño (2002). Một mẫu trong 5 ml của

trích xuất các enzyme đã được bổ sung vào 200 ml của SAPNA; sau 5 phút, hấp thụ ở mức 450

nm và 25 º C được đo, cuối cùng là hoạt động quimotrypsin được tính như

[(Abs450nm/min X 1000 X ml phản ứng / (8800 x mg protein).

 Bản thảo

2,6 Protein hồ sơ cá nhân của chất chiết xuất từ ​​enzyme

Protein hồ sơ đã được tiết lộ bởi gel sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide

điện di (SDS-PAGE), như được mô tả bởi Laemmli (1970). Gel polyacrylamide

được sử dụng để làm sáng tỏ hồ sơ cá nhân protein chiết xuất enzyme. A 10 ml số chia hết một số

trích xuất các enzym được trộn với 10 ml của bộ đệm mẫu (0,5 M Tris-HCl, pH 6,8,

glycerol, SDS 10% và 0,5% bromophenol màu xanh), sau đó, aliquots ngày 30 g chiết xuất

đệm đã được nạp vào gel acrylamide. Gel nạp sau đó nhuộm màu với coomassie

màu xanh và distained trong methanol: acid acetic (4:1), giải pháp.Gel được quét bằng cách sử dụng một GS-

700 Bio-Rad đo độ đậm đặc (BIO-RAD, Hercules, CA, USA).

Các cấu protein của các chất chiết xuất được phân tích bởi phần mềm Số lượng BioRad CHẤP NHẬN M

Một ®.

2,7 Các chế phẩm enzim hoạt động trong gel polyacrylamide

Các phương pháp được đề xuất bởi García-Carreño et al. (1993) được sử dụng để phát hiện sự hiện diện

các enzyme protease trong gan tụy tôm. Sau khi trích xuất enzyme

electrophoresized trong một gel gradient (80-20%), gel rửa sạch với nước cất

loại bỏ các dư thừa SDS và ngập nước vào một giải pháp casein 3% ở 4 º C trong 30 phút;

sau đó, gel được ngập nước thành casein giải pháp khác 3% tại 25 º C trong 90 phút.

Sau khi rửa sạch bằng nước cất để loại bỏ dư thừa casein, các hoạt động enzyme được dừng lại bằng cách nhấn chìm gel vào axit tricloaxetic 10 phút. Cuối cùng, các gel

màu với coomassie màu xanh cho 2 giờ và distained với các giải pháp methanol: acid acetic.

Hoạt động thủy phân protein đã được quan sát bởi sự hiện diện của các ban nhạc da trắng trên một tối nghĩa

nền.

2,8 Phân tích thống kê

Bản thảo

Một trong những cách phân tích phương sai được thực hiện để phân tích các dữ liệu đặc biệt

lấy mẫu ngày. Phương pháp điều trị xem xét tất cả các ngày được phân tích bởi một số biện pháp lặp đi lặp lại

phân tích phương sai. Sự khác biệt đáng kể đã được xác định với một bài kiểm tra Tukey-hoc. Một

mức độ tự tin của α = 0,05.

3. Kết quả

Gan tụy từ tôm bị nhiễm bệnh cho thấy một dung dịch nước bên ngoài và màu trắng

xuất hiện, tuy nhiên, các quan sát như vậy không phản ánh vào chỉ số hepatosomatic

(3-4%) của tôm bị nhiễm bệnh và không bị nhiễm bệnh (Hình 1).

CHẤP NHẬN M

3.1. Haemolymph các thông số

Không có sự khác biệt đáng kể đã được quan sát thấy trong số tôm bị nhiễm bệnh và không bị nhiễm bệnh

protein (60-110 mg / mL), glucose (0,1-0,5 mg / mL), acylglicerides (0,3-0,5 mg / mL),

cholesterol (0,1-0,3 mg / mL), ammonia (0,3-0,6 mg / mL) và urê (0,1-0,25)

nồng độ trong haemolymph (Hình 2). Ngược lại, sự khác biệt có ý nghĩa quan sát

nồng độ lactate và nitrit. Nồng độ lactate trong haemolymph của nhiễm

tôm cao hơn (p <0,05) so với tôm kiểm soát tại 18

 bài ngày tiêm chủng. Tương tự,

mức độ nitrit trong tôm nhiễm bệnh tăng đáng kể bởi 141% và 66% ở 15

 và 18

ngày tương ứng, so với kiểm soát.

Các thông số miễn dịch, tổng số PO, PO, proPO hoạt động và tập trung hemocyte cho thấy mức độ cao hơn trong nuôi tôm bị nhiễm bệnh so với kiểm soát tôm;

Tuy nhiên, sự khác biệt không đáng kể (Hình 3). Thống kê khác biệt giữa

phương pháp điều trị chỉ quan sát cho tổng số PO và proPO 7

 bài ngày tiêm chủng, trong

hoạt động của cả hai tham số là tôm bị nhiễm bệnh cao hơn so với

kiểm soát. Bản thảo

Hoạt động kháng khuẩn của haemolymph tôm bị ảnh hưởng đáng kể bởi các

Nhiễm trùng NHPB, giảm hoạt tính kháng khuẩn được quan sát thấy tôm bị nhiễm bệnh. Các

tập trung thuộc địa hình thành đơn vị (CFU) đã cao hơn trong nhóm bị nhiễm bệnh trong

hai tuần tiêm bài đầu tiên, tuy nhiên sự khác biệt đáng kể chỉ quan sát thấy ở

15

 ngày (Hình 4).

3.2. Enzyme tiêu hóa và hồ sơ protein

Các hoạt động của các enzym tiêu hóa bị ảnh hưởng bởi nhiễm trùng NHPB. Proteinase

hoạt động gia tăng với thời gian trong tôm bị nhiễm bệnh và so sánh với những người khỏi sự kiểm soát

tôm, các giá trị đăng ký được 81% và 77% cao hơn ở 15

 và 18

 ngày sau CHẤP NHẬN M

tiêm phòng tương ứng. Về hoạt động của trypsin và quimotrypsin, đáng kể

sự khác biệt quan sát thấy chỉ 15

 bài, ngày tiêm chủng, trong đó bị nhiễm bệnh tôm

cho thấy một hoạt động cao hơn cho cả hai enzyme (Hình 5).

Các hoạt động proteinase được quan sát thấy trong gel gradient (Hình 6), ban nhạc được định nghĩa là

quan sát thấy giữa 25,1 và 31,5 kDa, tuy nhiên không có sự khác biệt quan sát cho

enzyme hoạt động vào ngày thứ 18

bài tiêm chủng.

Các hồ sơ protein chiết xuất từ ​​enzyme được thể hiện trong hình.7. Các ban nhạc khác nhau

quan sát thấy trong một khoảng thời gian 14-120 kDa và một mô hình tương tự đã được quan sát cho tất cả các

phương pháp điều trị tại ngày lấy mẫu khác nhau, tuy nhiên một tăng đặc biệt vào nồng độ của các ban nhạc từ 66 đến 97% được quan sát thấy tôm bị nhiễm bệnh vào ngày thứ 15

bài tiêm chủng. Các hoạt động caseinolytic zymogram như vậy đã được phát hiện trong vòng một

khoảng 17 đến 120 kDa với một tăng từ 21,5 và 31 kDa (Hình 8),

tương ứng với trọng lượng phân tử của trypsin và quimotrypsin.Ban nhạc

mô hình đã được quan sát cho tất cả các phương pháp điều trị, tuy nhiên, một số khác biệt đã được quan sát, cho bản thảo

Ví dụ, một số ban nhạc cụ thể giữa khoảng 29-64 kDa không được phát hiện trong

enzyme chiết xuất từ ​​tôm bị nhiễm bệnh so với việc kiểm soát và ngược lại.

4. Thảo luận

Xem xét các thiệt hại mô đã được quan sát thấy trong gan tụy của tôm

nhiễm NHPB, việc thiếu sự khác biệt thống kê trong một số của haemolymph

tham số được kết quả bất ngờ. Tuy nhiên, những kết quả này có thể được giải thích bằng

"Hội chứng thích ứng chung" (GAS) được mô tả bởi Selye (1936) khẳng định rằng

sinh vật tiếp xúc với điều kiện căng thẳng, có khả năng duy trì một cân bằng nội môi

tình trạng ở một số mức huyết học của họ cho thời gian nhất định.Homeostasis như vậy là CHẤP NHẬN M

quan sát thấy ở hầu hết các thông số đo lường trong thời gian thử nghiệm.

Tuy nhiên, Martinez-Porchas et al. (2009) khẳng định rằng mặc dù một số huyết học

các thông số có thể không được sửa đổi trong thời gian căng thẳng do các khí, những người khác có thể hiển thị khác nhau

phản ứng. Về vấn đề này, mức độ lactate có xu hướng tăng theo thời gian trong các sinh vật bị nhiễm bệnh,

trong đó đề xuất rằng con đường trao đổi chất kỵ khí được kích hoạt để đối phó với năng lượng

nhu cầu gây ra bởi một điều kiện bất lợi (Aparicio-Simón et al., 2010).

Những kết quả này tương ứng với giai đoạn đầu của bệnh, trong đó off chết thấp

thường quan sát thấy (Vincent và Lotz, 2005), do đó, nó có thể năng lực của

tôm để chống lại một điều kiện bất lợi và duy trì cân bằng nội môi có thể chịu trách nhiệm về

tỉ lệ chết thấp trong giai đoạn đầu tiên của bệnh. Về tình trạng miễn dịch, sự gia tăng nồng độ nitrit có thể được kết hợp với

một sự kích hoạt của hệ thống miễn dịch của tôm. Nitric oxide, đóng một vai trò quan trọng trong

miễn dịch bảo vệ tôm, thường được chuyển đổi với các loài khác đạm như

nitrit (Bogdan, 2001). Kích hoạt của hệ thống miễn dịch cũng được quan sát trong

PO và proPO tổng mức 7

 bài ngày tiêm chủng. Thác proPO là kích hoạt bản thảo

khi được công nhận của các thành phần bức tường tế bào vi khuẩn và dẫn đến các proteolysis hạn chế của

proPO để PO hoạt động xúc tác sự hình thành melanin (Amparyup et al,

2009). Như vậy, sự gia tăng hoạt động của các tham số này là phản ứng thông thường khi

tôm bị nhiễm vi khuẩn gây bệnh (Chiu et al, 2007). Tuy nhiên, mức độ

trả lại giá trị ban đầu của họ và ngoài ra, không có sự khác biệt quan sát cho PO,

THC và kháng khuẩn hoạt động, phản ứng như vậy có thể được liên quan đến khí các giải thích

ở trên. Có thể giả sử rằng thay đổi đáng kể trên hầu hết các

các chỉ số sinh lý và miễn dịch của tôm bị nhiễm bệnh với NHPB có thể được phát hiện

trong 2

 hoặc 3

 giai đoạn của bệnh, ở đây, sau một thời gian dài căng thẳng hoặc bệnh tật,

phản ứng báo động chung xuất hiện (GAR), thay đổi mức độ của một số haemolymph CHẤP NHẬN M

thành phần; GAR sau đó theo sau kiệt sức và tử vong tương ứng (Martínez-

Porchas et al, 2009).

Các hệ thống tiêu hóa cũng bị ảnh hưởng bởi sự hiện diện của NHPB, tăng

protease hoạt động từ tôm bị nhiễm bệnh có thể có liên quan đến hành vi ăn của họ. Đối với

Chẳng hạn, tôm bị nhiễm bệnh với NHPB đã được quan sát để giảm thức ăn của họ

tiêu thụ, có nghĩa là lượng protein ít hơn, do đó, sự gia tăng hoạt động của protease

tối đa hóa quá trình thủy phân protein được sử dụng cho các quá trình dị hóa hoặc đồng hóa (Ezquerra

et al, 1997). Tăng cường như vậy trong hoạt động proteinase đã được quan sát thấy trong thủy sản

sinh vật được cho ăn với chế độ ăn protein thấp (Lee và Lawrence, 1985). Một xu hướng tương tự cũng được

quan sát cho các hoạt động cụ thể trypsin và quimotrypsin, hoạt động cao hơn của các enzym này đã được quan sát trong gel điện di tại cùng một ngày lấy mẫu, tuy nhiên,

các giá trị trở lại mức ban đầu như tôm xấp xỉ giai đoạn thứ hai của

bệnh (18

 ngày). Việc duy trì hoạt động cao proteinases cụ thể không phải là một

chi phí-hiệu quả chiến lược cho các sinh vật bị nhiễm bệnh, bởi vì trong căn bệnh này, một số protein

thành phần có xu hướng giảm. Bản thảo

Mặc dù có sự khác biệt không đáng kể đã được quan sát liên quan đến hồ sơ cá nhân của

chiết xuất enzyme, cần lưu ý rằng các hoạt động enzyme được quan sát thấy trên 64

kDa, trái ngược với báo cáo trước đây chỉ ra rằng các hoạt động enzyme không

quan sát thấy trên 64 kDa (Hernández et al, 1999;. Muhlia-Almazán năm 2002). Các ban nhạc

quan sát (67, 98 và 120 kDa) tương ứng với các enzyme loại peptidase (Godoy et al.

Năm 2008).

Kết quả cho thấy rằng NHPB tôm ảnh hưởng đến sinh lý, miễn dịch và

tình trạng dinh dưỡng của tôm, tuy nhiên bị nhiễm bệnh tôm có thể chịu được giai đoạn đầu tiên của

bệnh tật, duy trì cân bằng nội môi trong hầu hết các thông số đo được. Cuộc kháng chiến

hiện bằng tôm trong quá trình thử nghiệm có thể được liên quan đến sự sống còn cao quan sát CHẤP NHẬN MA

trong giai đoạn đầu tiên của bệnh. Nó quan trọng là khó khăn, để đánh giá sinh lý,

đáp ứng miễn dịch và dinh dưỡng của tôm trải qua giai đoạn tiên tiến của

hoại tử hepatopancreatitis.

Tài liệu tham khảo

Amparyup, P., Charoensapsri, W., Tassanakajon, A., 2009. Hai prophenoloxidases

quan trọng đối với sự tồn tại của vi khuẩn Vibrio harveyi thách thức tôm Penaeus monodon.

Miễn dịch học phát triển và so sánh 33, 247-256.

Aparicio-Simón, B., Pinon, M., Racotta, R., Racotta, RS, 2010.Thần kinh nội tiết và

phản ứng trao đổi chất của Thái Bình Dương tôm chân trắng Litopenaeus vannamei tiếp xúc với

cấp xử lý căng thẳng. Nuôi trồng thủy sản 298, 308-314.

Aranguren, LF, Briñez, B., Aragón, L., Platz, C., Carballo, X., Suarez, A., Salazar, M.,

Năm 2006. Hepatopancreatitis hoại tử (NHP) bị nhiễm Penaeus vannamei nữ

bố mẹ: Ảnh hưởng trên các thông số sinh sản, nauplii và chất lượng ấu trùng.

Nuôi trồng thủy sản 258, 337-343.

Avila-Villa, A., Martínez-Porchas, M., Gollas-Galvan, T., López-Elías, JA, Mercado,

L., Murguía-López, A., Mendoza-Cano, F., Hernandez-Lopez, J., 2011. Đánh giá

các loài vi tảo khác nhau và Artemia (Artemia franciscana) càng tốt

vật truyền bệnh của vi khuẩn hepatopancreatitis hoại tử. Nuôi trồng thủy sản 318, 273-276.

Bản thảo

Bodgan, C., năm 2001. Nitric oxide và đáp ứng miễn dịch. Thiên nhiên, 2 907-916.

Boonyaratpalin, M., Supamattaya, K., Verakunpiriy, V., Suprasert, D. năm 2001. Ảnh hưởng của

aflatoxin B1 trên hiệu suất tăng trưởng, các thành phần máu, chức năng miễn dịch và

thay đổi mô bệnh học trong nuôi tôm sú (Penaeus monodon Fabricius).

Nuôi trồng thủy sản 32 nghiên cứu, 388-398.

Chiu, CH, Guu, YK, Liu, CH, Pan, TM, Cheng, W., 2007. Đáp ứng miễn dịch và

biểu hiện gen trong tôm thẻ chân trắng, tôm chân trắng Litopenaeus, gây ra bởi Lactobacillus

plantarum. Cá và động vật có vỏ Miễn dịch học 23, 364-377.

Cuzon, G., Cahu, C., Aldrin, JF, Massager, JL, Stephan, C., Mevel, M., 1980.

Nạn đói có hiệu lực vào sự trao đổi chất của Penaeus japonicus.Kỷ yếu của thế giới

Nuôi trồng hải sản Hội 11, 410-423.

Ezquerra, JM, García-Carreño, FL, Haard, NF năm 1997. Ảnh hưởng của chế độ ăn uống thức ăn chăn nuôi

protease tiêu hóa từ gan tụy của tôm trắng (Penaeus vannamei).

CHẤP NHẬN MA

Tạp chí Thực phẩm Sinh hóa 21, 401-419.

García-Carreño, F.L., và Haard, N., năm 1994. Chuẩn bị exopeptidase làm giàu

phần từ gan tụy của decapods. Quy trình Sinh Hoá 29, 663-670.

doi: 10.1016/0032-9592 (94) 80044-8

García-Carreño, FL, Albuquerque-Cavalcanti, C., Navarrete del Toro, MA, Zaniboni

Filho, E., 2002. Proteinases tiêu hóa Brycon orbignyanus (Characidae,

Teleostei): Đặc điểm và tác dụng của chất lượng protein. So sánh Sinh Hoá

và 132 Sinh lý học, 343-352.

Gracia-Valenzuela, MH, Avila-Villa, LA, Yepiz-Plascencia, G., Hernandez-Lopez, J.,

Mendoza-Cano, F., Garcia-Sanchez, G., Gollas-Galvan, T., 2011.Đánh giá

khả năng tồn tại của vi khuẩn hepatopancreatitis hoại tử (NHPB) được lưu trữ ở -20 độ C

cho sử dụng trong nhiễm trùng buộc phải ăn Penaeus (Litopenaeus) tôm thẻ chân trắng. Nuôi trồng thủy sản

311, 105-109.

Gollas-Galvan, T., Hernandez-Lopez, J., Vargas-Albores, F. năm 1999. Prophenoloxydase

từ nâu tôm (Penaeus californiensis, Holmes) hemocytes. So sánh

Sinh Hoá và Sinh lý học 112, 77-82.

Hall, M., Văn Hàm, E.H. năm 1998. Hiệu quả của các loại hình căng thẳng trên đường trong máu ở

con hổ Gigant tôm, Penaeus monodon. Tạp chí Thế giới Nuôi trồng thủy sản xã hội

29, 290-299.

Bản thảo

Hernández, P., Cerenius, L., García-Carreño, FL, Söderhäll, K., 1999. Trypsin từ

Pacifastacus leninsculus gan tụy: Thanh lọc và nhân bản cDNA của

tổng hợp zymogen. Sinh học Hóa học 380, 499-501.

Hernandez-Lopez, J., Gollas-Galvan, T., Vargas-Albores, F. năm 1996. Kích hoạt của

prophenoloxidase hệ thống của tôm nâu (Penaeus californiensis Holmes)

haemolymph. So sánh Sinh Hoá và Sinh lý 104, 407-413.

Hernandez-Lopez, J., năm 2001. Diseño de Tecnicas para la cuantificación de moléculas

plasmáticas de camarón. Tesis sĩ. Centro de Investigación en Alimentación y

Desarrollo, A. C. Hermosillo, Sonora, Mexico.

Laemmli, U. K., năm 1970. Cleavage của các protein cấu trúc trong quá trình lắp ráp của người đứng đầu

vi khuẩn T4. Nature 227, 680-685.

Lee, G.L., Lawrence, A.L., 1985. Ảnh hưởng của chế độ ăn uống và kích thước tăng trưởng, thức ăn tiêu hóa và

các hoạt động enzyme tiêu hóa của tôm biển, Penaeus setiferus Linneaus.

CHẤP NHẬN MA

Tạp chí Thế giới Nuôi trồng thủy sản 16 Xã hội, 275-287.

Martínez-Cordova, LR, Martínez-Porchas, M., Cortés-Jacinto, E., 2009. Mexico và

thế giới tôm nuôi trồng thủy sản hoạt động bền vững, ngành công nghiệp gây ô nhiễm. Revista

Internacional de Contaminación Ambiental 25, 181-196.

Martínez Porchas M., Martínez-Cordova LR, Ramos-Enriquez R., 2009. Cortisol và

đường: chỉ số đáng tin cậy của stress cho cá. Pan-Tạp chí Thủy sản

4 Khoa học, 158-178.

Matazzo, V., Gallo, C., Marin, M.G., 2011. Ảnh hưởng của nhiệt độ trên tế bào và

các thông số sinh hóa trong Carcinus cua aestuarii (giáp xác, Decapoda).

Nghiên cứu môi trường biển 71, 351-356.

Muhlia-Almazán, A., García-Carreño, FL, năm 2002. Ảnh hưởng của lột xác và nạn đói trên

tổng hợp của các enzym thủy phân protein trong tuyến midgut của tôm thẻ chân trắng

Penaeus vannamei. So sánh Sinh Hoá và Sinh lý 133, 383-394.

Porchas-Cornejo, MA, Martínez-Cordova, LR, Ramos-Trujillo, L., Hernandez-Lopez,

J., Martínez-Porchas, M., Mendoza-Cano, F., 2011. Ảnh hưởng của thức ăn tự nhiên thúc đẩy

về sản xuất, dinh dưỡng, và các thông số miễn dịch của Litopenaeus

tôm thẻ chân trắng (Boone, 1931) bán thâm canh. Nuôi trồng thủy sản dinh dưỡng 17, e622

e628.

Selye, H., 1936. Một hội chứng được sản xuất bởi các tác nhân đa dạng có độc. Nature 138, 32-32.

ANUSCRIPT

Söderhäll, K., Hall, L., 1984. Lipopolysaccharide gây ra sự hoạt hóa của

prophenoloxydase kích hoạt hệ thống trong lysate haemocyte tôm càng. Biochimica et

Biophysica Acta 79, 99-104.

Bị mắc kẹt, K.C., Watts, S.A., Wang, S., 1996. Phản ứng sinh hóa trong nạn đói và

sau đó phục hồi Thái Bình Dương trong postlarval tôm trắng, Penaeus vannamei. Marine

125 Sinh học, 33-45.

Vargas-Albores, F., Guzmán, M., Ochoa, JL, năm 1993. Một giải pháp chống đông máu cho

haemolymph bộ sưu tập và nghiên cứu prophenoloxidase của penaeid tôm (Penaeus

californiensis). So sánh Sinh Hoá và Sinh lý 106, 299-303.

Vaseeharan, B., Ramasamy, P., năm 2003. Kiểm soát gây bệnh Vibrio spp. bởi vi khuẩn Bacillus

subtilis BT23, một probiotic có thể chữa bệnh cho tôm sú Penaeus

monodon. Thư Vi Sinh Học Ứng Dụng 36, 83-87.

CEPTED MAN

Vincent, A.G., Lotz, J.M., năm 2005. Thời gian khoá học của hepatopancreatitis hoại tử (NHP)

thử nghiệm bị nhiễm Litopenaeus tôm thẻ chân trắng và định lượng của NHP-vi khuẩn

bằng cách sử dụng real-time PCR. Bệnh của sinh vật thủy sản 67, 167-169.

Vincent A.G., Lotz J.M., 2007. Những tiến bộ trong nghiên cứu của hepatopancreatitis hoại tử

vi khuẩn (NHPB) ảnh hưởng đến tôm penaeid nuôi trồng thuỷ sản.Đánh giá trong ngành thủy sản

15 Khoa học, 63-73.