Câu 15 : Cơ sở lai phân tử. Phương pháp lai nouthern blot và ứng dụng :

1. Cơ sở lai phân tử :

DNA sợi kép khi được đun qua nhiệt độ nóng chảy Tm thì bị tách thành 2 sợi đơn.

Hai sợi đơn bổ sung cho nhau khi đặt ở một nhiệt độ tối ưu sẽ liên kết đặc hiệu với nhau, nhiệt độ lai nhỏ hơn nhiệt độ nóng chảy của mẫu dò ít nhất 200C,

Cơ sở lai protein : hai phân tử protein có cấu trúc không gian phù hợp nhau khi trộn với nhau trong một dung môi chúng sẽ liên kết đặc hiệu với nhau,

Khái niệm : hai phân tử tương tác điều hòa tạo thành phân tử lai và nhờ tín hiệu phát hiện. Các phép lai giữa DNA với DNA, DNA với RNA, RNA với nhau.

2. Phương pháp lai Nouthern Blot :

Là phương pháp lai giữa RNA của tế bào với mẫu dò DNA. Phương pháp này sử dụng để xác định kích thước và hàm lượng của một mRNA đặc trưng trong một hỗn hợp RNA. Nguyên tắc được tiến hành như sau:

_ RNA ( đã bị làm biến tính ) sẽ được phân tích theo kích thước nhờ điện di trên gel agarose có chứa chất làm biến tính. Các chất làm biến tính sẽ có tác dụng ngăn cản sự hình thành cấu trúc bậc hai sau khi đã biến tính. Do đó không cản trở sự di chuyển cũng như tách của các RNA trên gel.

_ Sau đó RNA được chuyển lên màng lai,

_ Những RNA cố định trên màng lai được đem lai với mẫu dò DNA có đánh dấu phóng xạ để tạo phân tử lai RNA_DNA,

_ Các phân tử lai được phát hiện nhờ kĩ thuật phóng xạ tự ghi.

* Ứng dụng:

_ Sử dụng phát hiện các mRNA,

_ Đánh giá được độ lớn mRNA.