Câu 24: Khái niệm realtime PCR, trình bày các pha phản ứng realtime:

1. Khái niệm realtime PCR:

Real time PCR là phản ứng PCR động (kinetic PCR ) mà trong đó số liệu phân tích được thu nhận thông qua phản ứng PCR, chính vì vậy sự nhân bản các gen quan tâm và việc phát hiện các sản phẩm có thể được kết hợp trong cùng một bước tiến hành thông qua việc sử dụng các hóa chất phát huỳnh quang trong phản ứng.

2. Các pha phản ứng realtime PCR:

1. Pha tuyến tính ( 10_15 chu kỳ ): phản ứng PCR mới bắt đầu nên giá trị huỳnh quang tại mỗi chu kỳ vẫn chỉ ngang bằng với giá trị huỳnh quang cơ sở, giá trị huỳnh quang chuẩn sẽ được tính toán trong giai đoạn này.

2. Pha hàm số mũ sớm: cường độ huỳnh quang sẽ đạt tới một giá trị ngưỡng mà giá trị này sẽ lớn hơn giá trị huỳnh quang chuẩn. Chu kỳ PCR tại giá trị này sẽ đạt chu kỳ ngưỡng Ct.

Giá trị Ct đại diện cho số bản sao được nhân nên trong mẫu thí nghiệm và nó được dùng để tính toán kết quả của thí nghiệm

3. Pha log: sự nhân bản các đoạn DNA trong phản ứng PCR sẽ đạt tối ưu tại pha log. Cường độ huỳnh quang sẽ tăng gấp đôi sau mỗi chu kỳ nhiệt.

4. Pha cân bằng: thành phần phản ứng trở nên giới hạn và lúc này giá trị huỳnh quang không còn ý nghĩa trong việc tính toán số liệu thí nghiệm. Cường độ huỳnh quang đạt giá trị cân bằng.