Câu 8: Đặc điểm của các thế hệ vector plasmid:

Vector plasmid là vector được tách chiết từ vi khuẩn.

Plasmid là những mẫu DNA nhỏ chứa ít gen chọn lọc, ngắn, dạng vòng, sợi đôi nằm ngoài NST. Có khả năng nhận 8_9kb gen ngoại lai, có thể mang một số gen của vi khuẩn và các gen này có thể biểu hiện thành protein. Với tính chất tự tái bản, plasmid là một vector chuyển gen để nhân dòng DNA cần thiết.

1. Các plasmid thế hệ thứ nhất:

Là các plasmid tìm thấy trong tự nhiên pSC101, ColE1 đã góp phần đầu tiên vào lịch sử tạo dòng. Các plasmid này có rất ít đặc tính cần thiết nên không được sử dụng làm vector tách dòng.

2. Các plasmid thế hệ thứ hai:

Các plasmid thế hệ 2 pBR322 được sử dụng để nhân dòng trong tế bào Ecoli, được cấu tạo phức tạp hơn bắt nguồn từ plasmid nhỏ và được cấu tạo thêm nhiều đoạn gen quý.

pBR322 có kích thước 4363bp và hai gen kháng thuốc, một chống chịu được ampicilline và một chống chịu được tetracycine. Có nhiều điểm nhận biết E cắt hạn chế, trong đó có nhiều E nằm trong gen kháng kháng sinh. pBR322 có số lượng bản sao lớn.

3. Các plasmid thế hệ thứ ba:

Đây là các plasmid mạnh và đa năng, tiện sử dụng cho nhiều RE khác nhau với hàng chục trình tự nhận biết của chúng được nối tiếp nhau thành một đoạn dài gọi là polylinker ( vùng đa nối ) hay multiple cloning sites ( các vị trí tạo dòng ).

Kích thước nhỏ, sao chép nhanh trong tế bào vi khuẩn, tạo số lượng bản sao lớn.

Các plasmid thế hệ 3 chia làm 3 nhóm lớn:

_ Dãy pUC như pUC18, pUC19

_ Dãy Gemini: Plasmid pGEM3, plasmid pCR2.1

_ Nhóm các plasmid Bluescript.