Câu 9: Đặc điểm của nhóm vector pUC. Giải thích hiện tượng khuẩn lạc xanh_trắng.

1. Đặc điểm của nhóm vector pUC :

pUC là plasmid của Univercity california, có kích thước 2,6kb và có một số đặc trưng sau:

_ Có một mảnh operon lac Z, các vi khuẩn sử dụng với pUC dùng để tổng hợp Enzym b- galactosidase

_ Có vùng polylinker với 13 vùng giới hạn của 13 E cắt hạn chế

_ Ở pUC18 vùng hạn chế ( EcoRI, SacI, KnpI, XmaI, BamHI, XbaI, SalI, HindI, AccI, BspmI, PstI, SphI, HindIII )

_Ở pUC19 vùng polylinker có trình tự ngược lại ( HindIII....,EcoRI )

_ Có một gen bền với ampicilline, gen này mã hóa cho protein vốn được tiết ra trong khoảng ngoại biên màng sinh chất của vi khuẩn.

_ Sự hiện diện của gen lacZ tạo thuận lợi cho vector tái tổ hợp bắng cách quan sát các vi khuẩn trên đĩa thạch để chọn vi khuẩn có khả năng tiếp nhận một plasmid. Sự có mặt của gen kháng kháng sinh ampicilline cho phép pUC được tiến hành nuôi cấy trên môi trường có ampicilline.

Ưu điểm: Kích thước nhỏ, dễ biến nạp vào tế bào vi khuẩn. Vùng polylinker cho phép gắn xen bất kỳ trình tự DNA lạ nào, hoặc có thể cho phép tạo dòng đoạn DNA có hai đầu dính khác nhau mà không cần chất gắn.

2. Hiện tượng khuẩn lạc xanh_trắng :

Chuẩn bị hai mẫu thử nghiệm mà plasmid tạo dòng có chứa gen lacZ (dãy pUC) một mẫu để so sánh còn mẫu kia để cài DNA lạ vào gen lacZ.

Sau đó nuôi cấy cả hai mẫu trong môi trường X_gal ( 5_brom_4_chloro_3-indolyl D_galactopynoside ). Chất cảm ứng này bị phân hủy bởi E. b- galactosidase tạo ra galactose và X ( dẫn xuất indol ), ngoài môi trường dẫn xuất này bị oxy hóa cho màu xanh đậm.

Qua quan sát ta thấy plasmid không chứa gen lạ cho khuẩn lạc màu xanh do gen lacZ tổng hợp Enzym b- galactosidase. Còn plasmid thứ 2 cho khuẩn lạc màu trắng chứng tỏ nó chứa DNA lạ được cài vào trong gen lacZ làm cho gen lacZ không tổng hợp ra Enzym b- galactosidase và cho những khuẩn lạc màu trắng.