1. Lấy đĩa cell sau đó hút hết dịch (media) trong đĩa 

2. Sử dụng khoảng 5ml – 6ml PBS cho vào đĩa, lắc đều nhẹ khoảng 4-5s rồi hút hết dịch trong đĩa.

3. Cho 2ml Trypsin/EDTA rồi để tủ ủ 37oC trong 4p.

4. Lấy cell plate kiểm tra trên kính hiển vi xem cell đã bong hoàn toàn ra khỏi đĩa hay chưa. Nếu chưa tiếp tục để thêm 1 phút.

5. Lấy đĩa ra khỏi tủ 37oC, bổ sung khoảng 5 ml dung dịch media DMEM.

6. Sử dụng pipet tráng đều mặt đĩa. Hút toàn bộ dung dịch chuyển vào ống falcon.

7. Ly tâm 800rpm trong 5 phút. Hút bỏ dung dịch.

8. Bổ sung 6ml – 7ml vào trong ống falcon. Pipet đều để hòa tan kết tủa.

9. Chia dung dịch vừa hòa tan vào các đĩa sao cho có tỷ lệ đều nhau.

• CHÚ Ý: Các loại đĩa nuôi cấy khác nhau sẽ yêu cầu lượng tổng thể tích khác nhau.

o Đĩa 150mm: Tổng thể tích yêu cầu là 20ml. Thông thường, lượng media đưa vào trong đĩa là 18ml – 19ml và lượng cell đưa vào là 1ml – 2ml dựa vào nhu cầu sử dụng.

o Đĩa 100mm: Tổng thể tích yêu cầu là 10ml. Thông thường, lượng media đưa vào trong đĩa là 8ml – 9ml và lượng cell đưa vào là 1ml – 2ml dựa vào nhu cầu sử dụng.

 Lưu ý: Khi thực hiện cell seeding, phụ thuộc vào từng loại đĩa cần có các bước bổ sung sau các bước chính ở trên.

• Với đĩa 100mm: Thường sử dụng để nuôi cell với mục đích duy trì hoặc làm stock. 1 đĩa 100mm đầy có thể dung để chia ra tối đa 3 đĩa cùng thể tích.

• Với đĩa 150mm: Đĩa thường được sử dụng cho những thí nghiệm cần một lượng lớn tế bào (lysosome isolation e.g.). Một đĩa 100mm có thể chia ra được 4 đĩa 150mm và một đĩa 100mm nhỏ để duy trì tế bào nhằm sử dụng trong thời gian ngắn.

• Khi nuôi cấy với đĩa 150mm, hiện tại mình sử dụng 2 đĩa 100mm để nuôi cho 8 đĩa 150mm và 1 đĩa 100mm với mục đích thí nghiệm là Lysosome isolation.